龙牡壮骨咀嚼片”对“阳虚”症大鼠骨代谢的实验研究

蒋鹏  沈 凯  刘 汴 生  朱 军  （ 华中科技大学同济医学院老年医学研究所  武汉430077）

摘  要  目的：探讨“龙牡壮骨咀嚼片”对骨质疏松的防治作用。方法：Wistar 大鼠48只，氢化可的松im  20d 建立“阳虚”症  骨质疏松模型。以该制剂为代表药，以0.9%氯化钠溶液为空白对照。模型大鼠随机分成“龙牡壮骨咀嚼片”高、低剂量组、 “龙牡壮骨颗粒”组及模型对照组，给药60d, 观察对骨代谢的影响。结果：“龙牡壮骨咀嚼片”能显著增加“阳虚”模型大鼠的  体重和血磷水平（P<0.05——0.01）， 能显著提高骨质密度、骨干重、灰重及骨钙含量。且“龙牡壮骨咀嚼片”高剂量组的骨干  重、灰重比“龙牡壮骨颗粒”组显著升高（P<0.05） 。  结论：龙牡壮骨咀嚼片能显著增加经氢化可的松诱导造成骨质疏松模型  大鼠的体重及骨质密度和血磷水平（P<0.05——0.01）， 提示“龙牡壮骨咀嚼片”确有促进钙、磷吸收，增加大鼠骨盐含量及骨 质密度的作用。

关键词 龙牡壮骨咀嚼片；“阳虚”症大鼠模型；骨代谢；实验研究

中图分类号：R965.1     文献标识码：A        文章编号：1008-049X（2005）12-0985-03

Experimental     Study      of     Bone     Metabolism     in      Yangxu     Mice      with     Longmuzhuanggu      Chewing     Tablets

Jiang   Peng,Shen   Kai,Liu    Biansheng,Zhu   Jun（Institute    of   Geriatric   Medicinel,Tongji   Medical    College,Huazhong    Science   and Technology    University,Wuhan     430077,P.R.China）

ABSTRACT      Objective: The effect of Longmuzhuanggu chewing tabelet on preventing and treating the osteoporosis was discussed.  Method:  The “Yangxu”model of osteoporosis with injecting hydrocortisone for 20 days was established.The model mice were divided  randomly into 4 groups:high and low doses of Longmuzhuanggu chewing tabelet group,Longmuzhuanggu granule group and distilled water group as control.The influences of bone metabolism were observed after giving drugs for 60 days. Result:  Longmuzhuanggu Che- wing  Tabelet  could  increase  the  body  weight  and  blood  phosphate  level  obviously（P<0.05——0.01），and  could  increase  the  bone  den- sity,bone ash and dry weight,bone calcium contant.The bone dry weight and bone ash weight of high doses Longmuzhuanggu chewing tabelets  were  obviously  higher  than  Longmuzhuanggu  granule  group（P<0.05）。 Conclusion:   Longmuzhuanggu chewing tabelets can  promote the absorbtion of calcium and phosphate exactly and increase the calcium content of bone and bone density of mice.

KEY  WORDS   Longmuzhuanggu   chewing   tabelets;“Yangxu”mice   model;Bone   metabolism;Experimental   Study

“龙牡壮骨颗粒”是健脾补肾中药制剂，具有 “健脾和胃。补肾滋阳”全面调整人体机能的作用， 常用于小儿缺钙、发育迟缓等症。为防治老年骨质 疏松症等骨质病变，武汉健民药业集团在“龙牡壮 骨颗粒”的基础上改剂制成“龙牡壮骨咀嚼片”。为 探讨该制剂与骨质代谢之间的关系以其对老年骨质 疏松症治疗作用，本实验以“龙牡壮骨咀嚼片”为代 表药，用氢化可的松建立大鼠“阳虚”症模型，观察 其骨质代谢的变化，并观察该制剂对这种变化的影 响，以期为临床治疗老年骨质疏松症提供可靠依据。

1  材料和方法

1.1  实验药物

“龙牡壮骨咀嚼片”及“龙牡壮骨颗粒”，由武 汉健民药业集团提供，于试验前加蒸馏水配成试验 浓度溶液后置4℃冰箱内备用，每周配制1次。氢化可的松注射液，芜湖长江药业有限公司生 产。

1.2  实验动物

健康清洁级Wistar 7w 龄大鼠，同济医科大学实 验动物中心提供。实验前饲养7d, 观察大鼠健康状况，然后挑选48只，雌雄各半，体重为220——180g

1.3  饲养条件

1.3.1  饲料及来源  大鼠标准颗粒饲料，其配方及 成分含量检测报告证实合格。

1.3.2      饲养条件   SYXK（鄂）2003 - 0005号许可 证的实验动物房。动物房内温度保持在20——25℃， 湿度40%——50%,光照及通风良好，受试动物自由 摄食及饮水

1.4  实验方法

1.4.1“      阳虚”模型的制备    健康清洁级大鼠48 只，雌雄各半，按20 mg·kg⁻¹·d⁻¹   在大腿外侧或颈背 部氢化可的松im, 连续20 d, 造成“阳虚”模型。

1.4.2  动物分组及剂量设置  造模前将大鼠编号 并取尾血进行6项生化指标检查作对照。造模后将 造模成功的40只“阳虚”模型大鼠按雌雄随机分 成：①“阳虚”模型对照组（模型组）;②“龙牡壮骨咀 嚼片”高剂量组（42.20 g 生药/kg,2.109 g生药/ ml, 简称高剂量组）;③“龙牡壮骨咀嚼片”低剂量组 （14.07g     生药/kg,0.703g     生药/ml, 简称低剂量 组）;④“龙牡壮骨颗粒”组（14.07 g 生药/kg,0.703   g 生药/ml, 简称颗粒组）4组。

1.4.3      给药方式 造模24 h 后取尾血进行6项生 化检查，并分别按上述剂量灌胃给各受试动物，②——④组大鼠灌胃4 ml,qd.①  组以0 .9%氯化钠溶液 灌胃，4 ml,qd 。 连续给药60 d 。每周根据体重增长 调整给药量。末次给药24 h 后处死大鼠，作各项观 察指标检测。

1.5  观察指标

1.5.1  一般项目  在实验期间观察大鼠一般体征、 外观、行为，每周称体重1次。

1.5.2  骨密度测定  处死大鼠后分离右股骨，选点 于近股骨头1/3处（股骨全长）固定，采用FF-647型单能光子骨密度测定仪（北京）行骨密度测定。

1.5.3 骨干重、骨灰重测定 处死大鼠分离右股骨  置烤箱（105℃）6 h 后，分析天平称重，测定骨干重： 右股骨高温电阻炉（马福炉）灰化后称重，测定骨灰  重，

1.5.4        血生化指标  碱性磷酸酶（AKP）   及肌酐 （Cr）  含量采用全自动生化分析仪（ASCA  美国）测 定：骨钙素含量（BGP, 药盒由北京东亚免疫技术研 究所提供），采用FJ-2003/50     型 r 免疫计数仪（西 安核仪器厂）测定；羟脯氨酸（Hyp） 含量采用721分 光光度仪（上海第三器厂）行 P-DMAB 比色法测 定²;骨钙含量采用AA-670   型原子吸收分光光度 仪（日本。岛津）测定：血钙采用EDTA 滴定法测定；血磷采用氯化亚锡磷钼蓝比色法测定i²。

1.6  统计学方法

统计各组数据的均值及标准差（x±s）    后用4检 验行组间均数差异显著性分析。

2  实验结果

2.1 “阳虚”模型的造模结果

造模7 d 后大鼠渐次出现纳呆、消瘦、活动减 少、拱背倦缩、毛色失泽等“阳虚”症状。20 d  后，大 鼠体重均有不同程度下降，但组间无显著性差异 （见表1）。

表1   各组“阳虚”大鼠实验前后体重变化（x±s,g）

组别	n 造模前体重	造模后体重	处死后体重
模型组	0  211.82±26.17	195.42±28.80	244.50±39.12
高剂量组	10   215.42±22.20	197.92±23.88	304.00±32.81
低剂量组	10   215.00±26.36	192.50±22.61	292.50±42.64
颗粒组	10   216.82±35.36	195.91±25.87	284.00±38.46*

注：与模型组相比，*P<0.05, 与模型组相比，P<0.01

2.2 “龙牡壮骨咀嚼片”对“阳虚”症大鼠血生化的 影响

对大鼠血液中与骨代谢密切相关的同项指标进 行检测，结果显示各组大鼠 AKP、Hyp、Cr 均有显著 性升高（P<0.01），      血磷、钙磷比、BGP 均有显著性 下降（P<0.01）;      “龙牡壮骨咀嚼片”二个剂量组和 “龙牡壮骨颗粒”组的 Cr、Hyp 均较模型组显著下降       （P<0.01），      而骨钙素、血磷显著上升（P<0.01）。

片剂组与颗粒组之间无差异，表明造模成功。（见 表2）。

2.3 “龙牡壮骨咀嚼片”治疗“阳虚”症大鼠后对骨 各项指标的影响

通过单能光子骨密度仪、原子吸收分光光度仪、 分析天平测定结果（见表3）

2.3.1  “龙牡壮骨咀嚼片”二个剂量组和“龙牡壮 骨颗粒”组的骨密度、骨干重、骨灰重、骨钙含量均 较模型组显著增加（P<0.05——0.01），        显示“龙牡壮 骨咀嚼片”和“龙牡壮骨颗粒”组均能显著增加经氢 化可的松造成“阳虚”模型大鼠的体重及骨质密度 和血磷（P<0.05——0.01）。

2.3.2  “龙牡壮骨咀嚼片”高剂量组骨干重与骨灰 重与颗粒组相比，亦有统计学差异（P<0.05）：      “ 龙 牡壮骨咀嚼片”高、低剂量组壮骨作用无统计学意 义，提示“龙牡壮骨咀嚼片”组间量效关系不明显。

表2“龙牡壮骨咀嚼片”对“阳虚”证大鼠血生化的影响（x±s）

组别	例数	时间	AKP （μ ·L-¹）	血钙 （mmol ·L-¹）	血磷 （mmol ·L-¹）	钙磷比	Hyp （mg ·d⁻¹）	CRE （umol ·L-¹）	BGP
对照组	10	造模前 造模后 给药后	195.29±25.58 248.69±35.43* 139.66±49.30*²	2.33±0.10 2.36±0.08 2.32±0.10	2.9I±0.24 1.77±0.32' 3.23±0.62*	1.25±0.12 0.75±0.12* 1.39±0.27*²	2.492±0.93 3.830±1.108  2.267±0.51*1	73.95±13.27 91.54±5.18* 69.93±7.36*²	2.61±0.93 1.14±0.61 1.10±0.43
高剂量组	10	造模前 造模后 给药后 造模前	189.35±21.09 248.69±35.43* 129.84±45.00*² 198.87±23.71	2.33±0.08 2.31±0.09 2.39±0.08*¹ 2.33±0.08	3.11±0.58 1.88±0.15* 2.37±0.67**1 2.94±0.47	1.34±0.26 0.82±0.06* 1.00±0.29* 1.23±0.23	2.595±0.85 3.527±1.05 1.601±0.237*2 2.625±0.54	78.50±5.73 91.32±4.78* 58.74±5.28**2 77.67±5.89	2.58±1.18 1.09±0.50* 1.94±0.61 2.78±1.12
低剂量组	10	造模后 给药后 造模前	246.50±35.54* 125.15±44.05*² 194.76±35.44	2.33±0.13 2.37±0.10 2.31±0.06	1.78±0.30* 2.02±0.58 2.97±0.47	0.77±0.16 0.85±0.24* 1.20±0.14	3.650±0.30 1.739±0.288*² 2.560±0.95	89.30±5.90* 60.00±8.01**2 72.99±6.65	1.07±0.49 1.81±0.58* 2.69±0.70
颗粒组	10	造模后 给药后	253.73±25.62* 137.59±37.09*²	2.30±0.06 2.30±0.095	1.82±0.25 2.26±0.67*	0.79±0.12* 0.99±0.28* ·	3.849±1.240 1.835±0.345*²	95.46±10.51* 59.61±7.05**2	1.22±0.46* 2.14±0.76*²

注：造模前与造模后相比，*P<0.01——0.001; 造模后与给药后相比，P<0.05; 造模后与给药后相比，²P<0.01——0.001

表 3   大鼠各项指标测定 （ x±s,n=10）

组别	骨密度	骨干重（g）	骨灰重（mg）	骨钙（μg-mg-1）
模型组	0.178±0.128	0.427±0.058	0.251±0.027	228.02±3.828
高剂量组	0.201±0.008*	0.537±0.046*	0.334±0.034*	242.08±5.897 ·
低剂量组	0.204±0.010*	0.513±0.044*	0.327±0.029 ·	236.68±4.295 ·
颗粒组	0.198±0.007*	0.488±0.045 ·¹	#0.302±0.030*	238.59±6.088*

注：与模型组相比，*P<0.01,与模型组相比，P<0.05, 与高剂量组相比，#P<

3  讨论

老年骨质疏松系慢性退行性病变。常由肾虚而 累及脾，脾虚则出现血生化不足。《内经》提出“肾 主骨”就是指肾与骨有密切的关系，即肾能接受五 脏六腑所传之精封而藏之，充实于骨、濡实于骨，对骨的生长发育和维持骨的成分及结构正常具有重要 作用。中医认为肾为先天之本，脾为后天之本，先天 不足，后天失调，必然出现一系列营养缺乏疾患。脾 主运化，主运化者指消化、呼吸及分布代谢。如果脾功能健全，营养充分，不仅可以保证后天，而且能够 在一定程度上弥补先天之不足。龙牡壮骨咀嚼片 以黄芪、党参补气养血，麦冬、龟板养阴，白术、山药 健脾，在于全面调整心、肾、脾的功能，增强机体生化活力，为运化吸收创造基本条件；龙骨、牡蛎以补钙 为主，配合五味子兼有安神定志，敛汗固涩功效，鸡内金、茯苓直接促进消化和代谢；大枣、甘草调和诸 药。全方用药甘温平缓，安全有效，以健脾为主，以益气为辅，运化功能正常，水谷之精行以吸收。因此以健脾为主，同时配合以含钙量高的龙骨、牡蛎等中 药以促进吸收，故既改善了全身情况，又增加了钙的吸收 。

目前在补肾中药制剂拮抗骨质疏松鼠模型的实 验中发现，复方补肾中药制剂可缩小鼠骨髓腔结构， 增强关节软骨厚度，使模型鼠骨骼的骨组织保持正 常的显微形态结构。同时，亦保护了性腺组织的正  常形态，维持体内性激素水平在正常范围。研究认  为[3.4:复方中药制剂对骨骼的作用途径可能是多方  面的，即直接增加成骨细胞活动，促进成骨细胞再  生，又可保护性腺组织而维持性激素水平，间接地促 进骨骼的正常代谢活动。

在应用肾上腺皮质激素期间，大鼠渐次“阳虚”症状，20天后，体重较用药前均有不同程度地下降。 服用“龙特壮骨咀嚼片”后，各药物组大鼠的AKP 、 Hyp、Cr 较模型组均有显著性升高（P<0.01），血磷、 钙磷比、BGP 均有显著性下降（P<0.01），  且 Cr 、 Hyp 亦均较模型组显著下降（P<0.01）， 骨密度、骨 干重及灰重和骨钙亦均较模型组有显著性升高（P<0.05——0.01），一方面提示本实验造模成功，另一 方面亦证明龙牡壮骨咀嚼片可恢复被诱导动物模型 因激素水平下降而失去的骨量，从而可以阻止和延 缓骨质疏松的发生，与报道相似5-7】。

龙牡壮骨冲剂在儿科的应用疗效是肯定的，在 应用于尿毒症病人治疗低钙血症方面亦证明是有效 的。在此基础上改变剂型后的龙牡壮骨咀嚼片依据 中医“脾为后天之本”的理论，重在和胃健脾，同时 辅以补钙药龙骨、牡蛎，大大增加了钙的吸收。老年人，尤其是有肾病、心脏疾病的老年病人服用后可 以避免加重水肿、心衰 。

本研究初步证明，龙牡壮骨咀嚼片对肾上腺皮 质激素所致的骨质疏松症有良好的防治作用。

参  考  文  献

1    刘忠厚.骨质疏松症[M ]. 北京：化学工业出版社，1992.71-89, 476-487,494-502,549-557,587-603

2  吴铁，廖进民，李青南，等。壮骨肾宝防治肾上腺皮质激素所致大 鼠骨质疏松的实验研究[J]. 中国中西医结合杂志，1996,16 （2）：102-104

3  李青南，黄莲芳，谢华，等。糖皮质激素所致大鼠骨质疏松症的定 量研究[J]. 中国药理学通报，1993,9（6）：475-476

4    陈奇。中药药理实验（全国高等医药院校应用教材）[M].     贵阳： 贵州人民出版社，1988.229-231.

5    陈勤.抗衰老研究实验方法[M].    北 京：中国医药科技出版社， 1996.304-309,608-610,660-671

6    钱桐荪. 肾脏病学[M].  南京：江苏科技出版社，1990.137

7    袁效安。龙牡壮骨冲剂对尿毒症患者血钙变化的观察[J].     实用 中西医结合杂志，1995,8（8）：590

（2005-03-14收稿2005-06-06修回）中国药师    2005年第8卷第12期  

4-2005-“龙牡壮骨咀嚼片”对“阳虚”症大鼠骨代谢的实验研究。pdf