龙牡壮骨冲剂对小鼠胃肠动力及胃泌素的影响

杨磊  许慧  罗艳军

【中图分类号】 R-33     【文献标识码】 B    【文章编号】 1006-2483（2009）05-0088-03

小儿胃肠动力性疾病十分常见,  占儿科胃肠门诊的 2/3, 现在临床治疗手段有限, 且副作用相对较大,  随着对祖国医学研究的深入, 发现小儿胃肠动力性疾病常和脾虚相关。龙牡壮骨冲剂是我省中成药大品种, 应用于临床多年, 主要用于治疗和预防小儿佝偻病, 软骨病;临床上还有健脾、和胃的功效。 目前其对胃肠动力的影响尚未见报道。 研究旨在了解龙牡壮骨颗粒对胃肠动力的影响, 以利于龙牡壮骨颗粒二次开发利用。

1   对象与方法

1.1    研究对象  雄性昆明种小 鼠,  平均 18 —— 20  g（4 ——6周 ），雌雄兼用, 购自湖北省预防医学科学院实验动物中心。

1.2   实验试剂  放免法测胃泌素 （GAS），放免试剂盒购 自北京华英生物技术研究所。 龙牡壮骨冲剂为武汉健民药业集团生产。

1.3   仪器   OHAUSPT200S电子天平, 美国出品;Labofug 400R离心机, 德国 Heraeus公司产品。

1.4   试验方法〔1〕:

1.4.1   营养性半固体糊制作〔2〕

取 5 g羧甲基纤维素溶于 25 ml蒸馏水中, 然后分别加入奶粉 8  g、4  g糖、淀粉 4  g,活性炭 3  g,搅拌均匀,  配成 150  ml约 150  g的半固体糊, 置冰箱中冷藏 12  h,使用前 2  h取出恢复常温。

1.4.2   龙牡壮骨冲剂对正常小鼠胃排空及小肠推进的影响

昆明种小鼠 40只, 按体重随机分成 4组:对照组 （蒸馏水灌胃 ）、龙牡壮骨冲剂大、中、小剂量组 （给药剂量分别为 6.3  g/kg、3.2  g/ kg、1.6  g/kg,灌胃 ）， 给药 75 min后给予营养性半固体糊 1  m只,  30  min后摘取眼球采血约 2  m。l 然后脱颈处死动物, 剖开腹腔, 结扎 胃贲门和幽门。 取 胃用滤纸拭干后称全重, 然后沿胃大弯剪开 胃体, 洗去 胃内容物后用滤纸拭干, 称胃净重。 胃内残留率 =（全重-净重 ）/全重 × 100%。 自盲肠处取上述小鼠的肠,  不加牵引铺平于白纸上,分别量取自幽门括约肌至炭糊最前端及至盲肠的距离。 计算小肠推进比 （%）=（炭糊移动距离 /幽-盲全长 ）×100%。

1.4.3   龙牡壮骨冲剂对胃复安所致小鼠胃排空的影响

昆明种小鼠 40只, 按体重随机分成 4组:模型组、龙牡壮骨冲剂大、中、小剂量组 （剂量同上, 灌胃 ），模型组小鼠蒸馏水灌胃, 后 3组小鼠给予相应剂量龙牡壮骨冲剂, 60 min后各组小鼠均给予胃复安 5 mg/kg尾静脉注射。 15  min后给予营养性半固体糊 1 ml/只,  其余步骤同 4.2, 计算 胃内残留率。

1.4.4   龙牡壮骨冲剂对阿托品所致胃排空的影响

昆明种小鼠 40只, 按体重随机分成 4组:模型组、龙牡壮骨冲剂大、中、小剂量组 （剂量同上, 灌胃 ），模型组小 鼠蒸馏水灌胃, 后 3组小 鼠给予相应剂量龙牡壮骨冲剂,  60  min后各组小鼠均给予阿托品 15 mg/kg尾静脉注射。  15 min后给予营养性半固体糊 1 ml/只, 其余步骤同 4.2, 计算胃 内残留率。

1.4.5   龙牡壮骨冲剂对新斯的明所致小鼠小肠推进的影响

昆明种小鼠 40只, 按体重随机分成 4 组:模型组、龙牡壮骨冲剂大、中、小剂量组 （剂量同上, 灌胃 ），模型组小 鼠蒸馏水灌胃, 后 3组小 鼠给予相应剂量龙牡壮骨冲剂,  60  min后各组小鼠均给予新斯的明 0.08 mg/kg尾静脉注射。 15 min后给予营养性半固体糊 1  ml/只,  其余步骤同 4.2, 计算小肠推进比 （%）。

1.4.6   龙牡壮骨冲剂对肾上腺素负荷小肠推进的影响

昆明种小鼠 40只, 按体重随机分成 4 组:模型组、龙牡壮骨冲剂大、中、小剂量组 （剂量同上, 灌胃 ），模型组小 鼠蒸馏水灌胃, 后 3组小 鼠给予相应剂量龙牡壮骨冲剂,  60  min后各组小鼠均给予肾上腺素 0.4 mg/kg尾静脉注射。 15 min后给予营养性半固体糊 1 m只, 其余步骤同 4.2, 计算小肠推进比 （%）。

1.4.7   龙牡壮骨颗粒对小鼠胃泌素 （GAS）、胃动素 （MTL）

及血管活性肠肽 （VIP）的影响

摘取眼球后取血 2 m,l注入含 10%EDTA.Na2 30μl和抑肽酶 10 μ

含 100 U/ml以上）的试管中混匀,  4℃离心,  取血浆放 -20℃保存, 测定时血浆复融后, 混匀,  4℃离心取上清液测定。 小鼠处死、开腹, 取胃组织及肠组织, 洗去 胃肠内容物后称重量, 于 1ml100℃生理盐水中煮沸 3 min,加入 1N冰醋酸 0.5 ml中于匀浆器中匀浆提取, 加入 1N的 NaOH0.5 ml中和,  4℃条件下, 离心 （3500r/min）30 min,取上清液,  -20℃下保存。 该试验采用放射免疫分析非平衡法进行测定。

1.5   统计学处理

数据用均数加减标准差表示 （-x±s），统计方法采用方差分析, 由 SP S13.0 统计软件处理。

2   结果

2.1   龙牡壮骨颗粒对小 鼠 胃排空的影响 （表 1）（胃残留率%）

冲剂各剂量组对正常小鼠胃排空无影响。 胃复安可使小鼠胃排空加速, 阿托品可使胃排空减慢, 冲剂各剂量组可逆转胃复安和阿托品对小鼠胃排空影响。

2.2   龙牡壮骨颗粒对小鼠小肠推进的影响 （表 2）（小肠推进比%）

表 1   龙牡壮骨颗粒对小 鼠胃排空的影响

组  别	n	正常小鼠	胃复安组	阿托品组
对照组	10	49.2 ±8.1	49.2 ±8.1	49.2 ±8.1
模型组	10	-	32.3 ±9.0 a	76.7 ±5.3a
龙牡壮骨冲剂 （大剂量组 ）	10	45.8 ±8.6	48.4 ±7.2 b	48.4 ±14.2b
龙牡壮骨冲剂 （中剂量组 ）	10	40.1 ±12.8	40.8 ±6.6 b	42.7 ±10.3b
龙牡壮骨冲剂 （小剂量组 ）	10	44.7 ±15.3	36.5 ±4.9	35.3 ±9.5ab

注:与对照组相比较,  aP<0.05;与同列模型组比较,  bP<0.05

表 2    龙牡壮骨颗粒对小鼠小肠推进的影响

组  别	n	正常小鼠	新斯的明组	肾上腺素组
对照组	10	65.8 ±9.3	65.8 ±9.3	65.8 ±9.3
模型组	10	-	79.7 ±6.8 a	46.6 ±8.6a
龙牡壮骨冲剂 （大剂量组 ）	10	68.3 ±10.3	68.4 ±11.3 b	59.2 ±8.0b
龙牡壮骨冲剂 （中剂量组 ）	10	66.5 ±8.4	69.2 ±13.1	57.8 ±7.4b
龙牡壮骨冲剂 （小剂量组 ）	10	63.3 ±8.5	73.2 ±7.5 a	54.7 ±5.8a

注:与正常组相比较,  aP<0.05;与同列模型组比较,  bP<0.05

冲剂对正常小鼠小肠推进速度无影响。 新斯的明可加速小鼠小肠推进比,  肾上腺素可降低小肠推进比, 冲剂可逆转新斯的明和肾上腺素对小鼠小肠推进速度影响。

2.3   龙牡壮骨颗粒对小鼠血浆 GAS的影响（表 3）（pg/ml）

表 3    龙牡壮骨颗粒对小鼠血浆 GAS的影响

组  别	n	正常小鼠	胃复安组	阿托品组	新斯的明组	肾上腺素组
对照组	10	112.6 ±17.8	112.6 ±17.8	112.6 ±17.8	112.6 ±17.8	112.6 ±17.8
模型组	10	-	119.6 ±21.4	71.9 ±20.0 a	142.6 ±23.0 a	117.3 ±18.5
龙牡壮骨冲剂 （大剂量组 ）	10	86.1 ±26.4 a	93.7 ±24.5	98.4 ±13.1 b	106.8 ±17.3b	97.3 ±19.8
龙牡壮骨冲剂 （中剂量组 ）	10	98.6 ±17.3	110.1 ±18.5	72.4 ±19.8 a	124.6 ±14.8b	106.3 ±21.6
龙牡壮骨冲剂 （小剂量组 ）	10	107.9 ±16.0	109.5 ±13.3	70.5 ±15.2 a	134.3 ±18.5 a	113.5 ±17.4

注:与正常组相比较,  aP<0.05;与同列模型组比较,  bP<0.05

2.4   龙牡壮骨颗粒对小鼠 胃肠组织 GAS的影响 （表 4）      （pg/100mg）

表 4    龙牡壮骨颗粒对小鼠胃肠组织 GAS的影响

组  别	n	正常小鼠	胃复安组	阿托品组	新斯的明组	肾上腺素组
对照组	10	158.4 ±21.5	158.4 ±21.5	158.4 ±21.5	158.4 ±21.5	158.4 ±21.5
模型组	10	-	173.7 ±23.5a	95.3 ±21.4 a	197.3 ±14.7 a	143.8 ±13.4
龙牡壮骨冲剂 （大剂量组 ）	10	162.4 ±17.9	154.7 ±16.6	139.7 ±16.3 b	162.7 ±15.6b	160.5 ±17.0 b
龙牡壮骨冲剂 （中剂量组 ）	10	147.4 ±23.8	144.0 ±16.9b	123.8 ±22.5 ab	169.0 ±19.3	154.3 ±15.4
龙牡壮骨冲剂 （小剂量组 ）	10	167.1 ±19.6	166.7 ±18.6	98.3 ±16.2 a	184.7 ±20.1 a	158.1 ±21.4

注:与正常组相比较,  aP<0.05;与同列模型组比较,  bP<0.05

从表 3、表 4结果分析,  胃复安、肾上腺素对血浆和胃肠组织 GAS水平无影响, 阿托品可致 胃排空减慢的同时使血浆和胃肠组织 GAS水平降低,  新斯的明可致小肠推进比增加的同时使血浆和 胃肠组织 GAS水平升高, 龙牡壮骨冲剂可使血浆和胃肠组织局部 GAS基本回升到正常水平。

3   讨论

文献研究表明,  胃肠运动调节机制非常复杂〔 8-11〕。 用胃复安、阿托品、新斯的明、肾上腺素注射液尾静脉注射复制胃肠动力紊乱小鼠模型, 结果显示 胃复安可使 胃排空加速, 阿托品可使胃排空减慢, 新斯的明可致小肠推进比增加,  肾上腺素可致小肠推进比降低, 表示造模成功。 本文采用营养性半固体糊为食物, 其营养结构更接近动物日常食物, 因此能更客观、准确地反映动物胃排空状况及药物影响〔 7〕。

该研究发现, 龙牡壮骨冲剂对正常小鼠胃排空和小肠推进比无影响, 但对龙牡壮骨冲剂对胃复安所致胃排空加速、阿托品所致胃排空减慢、新斯的明所致小肠推进比增加、肾上腺素所致小肠推进比降低有逆转作用, 且从量效关系看随剂量增大作用明显。 龙牡壮骨冲剂对于胃肠运动偏抑或偏亢机能状态下具有双向调节作用, 符合 目前中医理论的新学说“霰弹学说 ”〔3〕, 即该中药复方作用于多靶体, 有别于西药单体制剂作用于单靶体机制, 可起到双向调节作用, 体现了中药药理作用的优势。

龙牡壮骨冲剂三个剂量组均对新斯的明所引起能胃排空亢进具有显著的对抗作用, 提示龙牡壮骨冲剂对 胃运动抑制可能与其作用于胆碱能神经递质有关。 胃复安是多巴胺受体拮抗剂并具有 5-羟色胺受体的兴奋作用, 它通过对多巴胺受体的阻断和兴奋位于肠肌丛非经典性 5-羟色胺受体而促进乙酰胆碱释放, 增加胃蠕动, 加快 胃排空。 龙牡壮骨冲剂能显著对抗胃复安的作用, 有可能直接作用于胆碱能神经系统。 此外, 龙牡壮骨冲剂能减弱胆碱能 M受体阻断剂阿托品对胃排空运动的抑制作用, 也均佐证了龙牡壮骨冲剂的效应可能与其作用于胆碱能神经系统有关。

胃泌素 （gastrin, GAS）是 由 17 个氨基酸组成的多肽,  主要由胃窦及小肠小部粘膜的 G细胞分泌, 人胰岛 D细胞也能分泌。 其对整个胃肠道均有作用, 短期的作用是刺激胃酸的分泌, 主要的长期作用是促进胃粘膜增生的营养作用, 促进胃肠道的分泌, 增加胃肠道的运动, 使胃肠、胆囊的收缩作用加强等〔 4, 5〕。 研究发现,  胃复安、肾上腺素对血浆和 胃肠组织中 GAS水平无影响;阿托品可致胃排空减慢的同时阿托品可致血浆和胃肠组织中 GAS水平降低;新斯的明可致小肠推进比增加的同时可致血浆和胃肠组织中 GAS水平升高,提示胃肠功能紊乱同时可伴有 GAS分泌异常。 龙牡壮骨冲剂对正常组小 鼠血浆和组织中 MTL水平无影响, 对各组所致 GAS紊乱有逆转作用, 且与剂量有一定的相关性, 其对胃肠动力的调节作用可能是通过影响血液和局部组织中的GAS水平实现的。

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（收稿日期:2009-06-02）

（本文编辑:赵珣 ）

《公共卫生与预防医学》2009年第20卷第5期

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